羟自由基清除能力测定试剂盒使用说明书

产品说明：羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。 H2O2/ Fe2+ 通过 Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化为 Fe3+ ，导致 536nm 吸光度下降，样品对 536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

操作步骤：

一、 样品的制备：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。

3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如 5 mg/mL。

二、 操作步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长 536nm，蒸馏水调零。

2、 操作表空白管 对照管 测定管试剂一（μL） 30 30 30

试剂二（μL） 80 80 80

试剂三（mL） 20 20 20 立即混匀，防止局部颜色过浓样品（μL） 50 试剂四（μL）

20 20 H2O（μL） 70 50 混匀 37℃，60min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 536nm 处吸光值，空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为 A 空、A 对和 A 测。 注意：空白管和标准管只需测定一次。

计算公式：羟自由基清除率 D% =（A 测-A 对）÷（A 空-A 对）×100% A 空、A 对、A 测：空白管、对照管和测定管的吸光值。注意事项：为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。

产品内容：标准液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。试剂三：

液体 3mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。