细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)使用说明

产品说明：自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长 355nm。阻断滤光片波长 512nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC 法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为 MDC 染色液，可与 EB 合用双染。

操作步骤(仅供参考)：

(一)、MDC单独染色：

1、 用去离子水稀释10×Wash buffer1×。

2、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。

3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度10 6 /ml。

4、 取适量90μl的细胞悬液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，轻轻混匀。

5、 室温避光染色15～45min。

6、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。

7、 加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。

8、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

(二)、与EB双染色：

1、 用去离子水稀释10×Wash buffer1×。

2、 800g离心5min，收集细胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。

3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度10 6 /ml。

4、 取适量90μl的细胞悬液新的EP管中，分别加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，轻轻混匀。

5、 滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。

6、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。

染色结果：正常细胞 细胞被均匀染成黄绿色荧光凋亡细胞 染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒。

注意事项：

1、 MDC Stain和EB试剂有一定毒性，请小心操作。

2、 吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

3、 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。