产品简介

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产品介绍

T4多聚核苷酸激酶(T4PNK)能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷上。T4多聚核苷酸激酶还具有3’磷酸酶活性，将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。该酶经修饰后，其3’磷酸酶活性缺失，但仍保留了所有激酶的活性。

应用

1.DNA或RNA5′末端的磷酸化，以便进行连接反应。

2.DNA或RNA的末端标记，用作探针和进行DNA

测序

3.将3′端已经磷酸化的单核苷酸5′磷酸化，制备

pNp底物，用于添加到DNA或RNA的3′端

4.对3′端有磷酸基团的寡核苷酸的5′端进行标记

注意事项

（1）1×T4多聚核苷酸激酶反应缓冲液：70mMTris-HClpH

7.6，10mMMgCl2，5mMDTT，37°C温育。

（2）热失活：65°C加热20分钟。

（3）在放射性标记实验中，可用1×T4多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50pmol的γ-[32P]ATP和20单位的酶37℃温育30分钟。

（4）T4多聚核苷酸激酶需要ATP才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含ATP。因此在磷酸化修饰核酸时请单独添加终浓度0.5~1mMATP。

（5）要提高平齐末端或5’凹陷末端的磷酸化效率，可在加入T4多聚核苷酸激酶前，先将DNA溶液于70°C加热5分钟，然后冰上冷却，并加入5%（W/V）的PEG-8000。

（6）一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中37°C温育30分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它DNA片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活T4多聚核苷酸激酶。

T4多聚核苷酸激酶(3’磷酸酶活性缺失)

T4多聚核苷酸激酶(3’磷酸酶活性缺失)