产品简介

索莱宝索莱宝产品覆盖：生化试剂、蛋白与免疫、多肽、抗体、ELISA、流式分析、分子生物学、细胞生物学、小分子化合物、生化试剂盒、染色试剂、分析标准品、微生物培养、层析介质、磁珠、仪器和耗材、纳米材料、化学合成等 嘌呤霉素 58-58-2

说明：蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

使用方法

1.建议使用浓度

哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；

大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。

2. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。

1） Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜；

2） Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞；

3） Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。

4） 根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；

5） 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。

3. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。

1）细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。

2）每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。

4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。

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标题:Palmitoylation alters LDHA activity and pancreatic cancer response to chemotherapy

成员:Luojun Chen, Xiaoke Xing, Yue Zhu, Yali Chen, Huadong Pei, Qibin Song, Juanjuan Li, Pingfeng Zhang

论文因子:9.7 发表期刊:CANCER LETTERS pmid:38331089

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标题:CD97 inhibits osteoclast differentiation via Rap1a/ERK pathway under compression

成员:Wang Wen, Wang Qian, Sun Shiying, Zhang Pengfei, Li Yuyu, Lin Weimin, Li Qiwen, Zhang Xiao, Ma Zhe, Lu Haiyan

论文因子:14.9 发表期刊:International Journal of Oral Science pmid:38311610

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标题:Aggresome formation promotes ASK1/JNK signaling activation and stemness maintenance in ovarian cancer

成员:Chen Yurou, Qiang Yulong, Fan Jiachen, Zheng Qian, Yan Leilei, Fan Guanlan, Song Xiaofei, Zhang Nan, Lv Qiongying, Xiong Jiaqiang, Wang Jingtao, Cao Jing, Liu Yanyan, Xiong Jie, Zhang Wei, Li Feng

论文因子:16.6 发表期刊:Nature Communications pmid:38351029

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标题:Exosome Heterogeneity Affects the Distal “Barrier-Crossing" Trafficking of Exosome Encapsulated Quantum Dots

成员:Di Wu, Hang Sun, Bingwei Yang, Erqun Song, Yang Song, Weihong Tan

论文因子:17.1 发表期刊:ACS Nano pmid:38394382

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标题:Liensinine, a Novel and Food-Derived Compound, Exerts Potent Antihepatoma Efficacy via Inhibiting the Kv10.1 Channel

成员:Biao Ma, Sai Shi, Wei Guo, Hailin Zhang, Zhen Zhao, Hailong An

论文因子:6.1 发表期刊:JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY pmid:38382537

注意：以上文献 仅供参考

嘌呤霉素 58-58-2

嘌呤霉素 58-58-2