维生素E检测试剂盒说明书
分光光度法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

规格：50管/24样

维生素E检测试剂盒产品组成： 提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存。 试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存。

产品说明： 维生素E（VitaminE）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中主要的抗氧 化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常 功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用 价值。 VE还原Fe3+为Fe2+，Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物，在530nm有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器 天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、漩涡震荡仪。

操作步骤：

一、样本处理 1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.2g，加入1mL提取液） 加入提取液，充分匀浆后用提取液定2mL，在漩涡混匀仪上震荡5min，于25℃， 5000g离心10min， 取上层测定。 2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议1000万细胞加 入2mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；在漩 涡混匀仪上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。 3. 血清：取0.2mL，加1.9mL提取液，漩涡仪混匀上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层 测定。

二、测定操作 对照管 测定管 样品（μL） 500 500 试剂一（μL） 100 100 试剂二（μL） 100 试剂三（μL） 100 充分混匀，25℃反应 5min 试剂四（μL） 300 300 充分混匀，于 1mL 玻璃比色皿，无水乙醇调零，测定 530nm 处吸光值，记 为 A 对照管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管。

三、计算公式
标准曲线：y=0.022x+0.0065， R2=0.9978 1. 按照蛋白含量计算 VE含量（μg/mgprot）=（△A-0.0065）÷0.022×V反总÷（V样×Cpr） =181.8×（△A-0.0065）÷Cpr 2. 按照样本质量计算 VE含量（μg/g）=（△A-0.0065）÷0.022×V反总÷（V样×W÷V样总） =181.8×（△A-0.0065）÷W 3. 按照细胞数量计算 VE含量（μg/104 cell）=（△A-0.0065）÷0.022×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总） =181.8×（△A-0.0065）÷ 细胞数量 4. 按照液体体积计算 VE含量（μg/mL）=（△A-0.0065）÷0.022×V反总÷V样×20 =1818×（△A-0.0065） V反总：反应总体积，1mL；：V样：加入样本体积，0.5mL；V样总：加入提取液体积，2mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g 注意事项： 1. 若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。 2. 低检出限为 29.5μg/g。