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产品名称:β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法

产品型号:BC2625 2880

产品报价:

产品特点:β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法
品牌:Solarbio | 货号:BC2625
检测方法 : 微量法
规格:100管/48样

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BC2625 2880β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法的详细资料:

            β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法

测定意义:β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。

测定原理:β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰,测定405nm光吸收增加速率,可计算β-木糖苷酶活性。

需要的仪器,耗材:天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 

                β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法

一、粗酶液提取: 1. 植物样本:称取约 0.1g 样品,加 1mL 提取液充分冰浴匀浆,然后 12000rpm,4℃,离心 20min,弃沉淀 ,取 20μL 上清测定蛋白含量,剩余上清作为待测酶液。 2. 细菌、真菌样本:收集约 500 万个细胞,加入 1mL 提取液,超声波破碎(冰浴,功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000rpm,4℃,离心 10min,弃沉淀 ,取 20μL 上清测定蛋白含量,剩余上清置于冰上待测。 3. 标准液的处理:用试剂二将标准液稀释 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0μmol/ml。二、测定操作表: 1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长 405nm,对照管调零。 2、操作表对照管 测定管 标准管酶液(μL) 40 40 40 试剂一(μL) 10 试剂二(μL) 80 70 80 混匀,45℃水浴 20min 试剂三(μL) 80 80 80 混匀,静置 5min,对照管调零, 微量石英比色皿/96 孔板,测定 405nm 吸光值,记为 A405。

                   β-木糖苷酶测定试剂盒 微量法

β-木糖苷酶活性计算公式:根据标准管的吸光度(x)和浓度(y,μmol/ml)建立标准曲线,将△A带入标准曲线中,计算 样品生成的产物量(μmol/ml)。 1、按蛋白含量计算酶活定义:45℃,pH7.4 时,每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1 mol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性(μmol/min / mg prot)=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=0.25×y÷Cpr 2、按样本质量计算:酶活定义:45℃,pH7.4 时,每克样品 1min 内催化产生 1 mol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性(μmol/min /g)=(y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=0.25×y ÷W 3. 按细胞数量计算:酶活定义:45℃,pH7.4 时,每 10 4个细胞 1min 内催化产生 1 mol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性(μmol/min /10 4cell)= (y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.0005×y Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.2mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数, 500 万;T:反应时间,20min。

 

 

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