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产品名称:Mouse IL-1β ELISA KIT

产品型号:96T

产品报价:

产品特点:Mouse IL-1β ELISA KIT索莱宝ELISA试剂盒的优势:
1,包被的酶标板单板可拆(能拆分成12个8孔的酶标条)
2,提供免费代测代检服务,代出实验数据
3,发文章高奖励
4,磁铁可吸附式包装盒,包装精美耐用

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96TMouse IL-1β ELISA KIT的详细资料:

 

Mouse IL-1β ELISA KIT

目       录

 

背景介绍………………………………………………………………………………

 

检测原理………………………………………………………………………………

 

注意事项………………………………………………………………………………

 

安全提示………………………………………………………………………………

 

试剂盒组成及储存……………………………………………………………………

 

自备实验器材…………………………………………………………………………

 

样品收集及储存………………………………………………………………………

 

试剂准备………………………………………………………………………………

 

检测步骤………………………………………………………………………………

 

结果判断………………………………………………………………………………

 

参数表征………………………………………………………………………………

 

参考文献………………………………………………………………………………

 

常见问题分析及解决办法……………………………………………………………

Mouse IL-1β ELISA KIT背景介绍:

    IL-1分为IL-1a, IL-1β两种,IL-1在不同种属中有较高同源性。在氨基酸水平上,IL-1α和IL-1β在不同种属同源性分别为60%~70%和75%~78%;但在同一种属中IL-1α与IL-1β同源性只有25%。IL-1β主要由血液中的单核细胞和巨噬细胞产生 (18), 星形细胞,少突神经胶质细胞,肾上腺皮质细胞,NK细胞,内皮细胞,角质形成细胞,巨核细胞,血小板,神经元,中性粒细胞,成骨细胞,许旺细胞,滋养层细胞,T细胞和成纤维细胞也可产生IL-1β。IL-1具有广泛的免疫调节作用,并有致热和介导炎症的作用。

 Mouse IL-1β ELISA KIT

检测原理

    Solarbio (Solarbio ®)ELISA试剂盒采用基双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗小鼠IL-1β单克隆抗体包被在酶标板上;分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本,标准品和样本中的小鼠IL-1β会与酶标板上的包被抗体充分结合;洗板后加入生物素化抗小鼠IL-1β抗体,该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的小鼠IL-1β发生特异性结合;洗板后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合;洗板后加入显色剂底物TMB,若反应孔中样品存在不同浓度的小鼠IL-1β,则HRP会使无色TMB变成不同深浅(正相关)的蓝色物质,加入终止液后反应孔会变成黄色;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)处测定反应孔样品吸光度(OD),样本中的小鼠IL-1β浓度与OD成正比,通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中小鼠IL-1β的浓度。

原理图:

注意事项:※※※

1. 试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。

2. 试剂盒未使用时应保存在2-8℃冰箱,已复溶未用完的标准品,请丢弃。

3. 试剂盒使用前在室温恢复30 min且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。

4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持*。

5. 为避免交叉污染,请在试验中使用1次性试管,枪头封板膜及洁净塑料容器.

6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 

盖上,使用前请离心处理(5-10 S即可),使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请用移液器小心吹打几次。

7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的          

试剂代替本试剂盒中的某单个组分

8. 为保证结果准确,每次检测均做标准曲线。

 

安全提示:试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作人员在使用时带上手套并注意防护;在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗;检测血液样本及其它体液样本时,请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。

 

试剂盒组成及储存

试剂盒组成

规格(96T)

规格(48T)

保存条件

抗体预包被酶标板

 

8*12

8*6

2-8

标准品

2支

1支

-20

SR1标准品/样本稀释液

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

浓缩生物素化抗体

120 ul(100X)

60 ul(100X)

2-8

SR2生物素化抗体稀释液

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

浓缩酶结合物(避光)

120 ul(100X)

60 ul(100X)

2-8

SR3酶结合物稀释液

16 ml/瓶

8 ml/瓶

2-8

浓缩洗涤液 (20×)

30 ml/瓶

15 ml/瓶

2-8

显色底物(避光)

12 ml/瓶

6 ml/瓶

2-8

终止液

12 ml/瓶

6 ml/瓶

2-8

封板胶纸

4张

2张

 

说明书

1份

1份

 

 

自备实验器材(不提供,可代购)

1. 酶标仪(主波长450nm,参考波长630nm)

2. 高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3. 洗板机或洗瓶

4. 37℃

5. 双蒸水,去离子水,量筒等

6. 稀释用聚丙烯试管

 样本收集及储存:

1. 细胞培养上清:

将细胞培养基移无菌离心管,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),避免反复冻融。

2. 血清样本:

室温血液自然凝固20 min后,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。

3. 血浆样本:

将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合20 min,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),避免反复冻融

注意:血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的高值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。

试剂准备

1. 试剂回温:先在实验前30 min将试剂盒,待测样本放置于室温,浓缩洗涤液如出现结晶,请放入37℃温浴直到结晶全部溶解

2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将20倍浓缩洗涤液稀释成1倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入4℃冰箱保存。

3. 标准品梯度稀释加入标准品/样本稀释液(SR1)1ml冻干标准品中,静置15分钟待其*溶解后轻轻混匀(浓度为2000pg/ml),然后按照以下浓度:2000、1000、 500、 250、125、62.5、31.25、 0 pg/ml进行稀释。复溶过的标准品原液(2000pg/ml)未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其贮存在-20~-80℃冰箱,具体如下

 

4. 生物素化抗体工作液:预先计算好试验所需用量,用生物素化抗体稀释液(SR2)100倍抗体浓缩液稀释成1倍应用工作液(稀释前充分混匀在30分钟内加入到反应孔中。

生物素化抗体工作液具体稀释方法如下:

板条

浓缩生物素化抗体(1:100):μL

检测稀释液(SR2):μL

2

20

1980

4

40

3960

6

60

5940

8

80

7920

10

100

9900

12

120

11880

 

5. 酶结合物工作液:按每次试验所需用量配制,用酶结合物稀释液(SR3)将100浓缩酶结合物稀释成1倍应用工作液稀释前离心),请在30分钟内使用

酶结合物工作液具体稀释方法如下:

板条

浓缩酶结合物(1:100):μL

检测稀释液(SR3):μL

2

20

1980

4

40

3960

6

60

5940

8

80

7920

10

100

9900

12

120

11880

 

6. 洗涤方法:

自动洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,注入洗涤液为300ul/孔,注与吸出间隔为30秒,洗板5次。

手工洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,用洗瓶加入洗涤液300ul/孔,静止30秒后甩净酶标板孔中液体,在厚迭的吸水纸上拍干,洗板5次。

 

 

结果判断

1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测,请用 450 nm 的OD测定值减去630 nm的OD测定值。

2.计算标准品、样品的平均OD值:每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值

3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品中IL-1β含量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数

参数表征

 

1. 数据及标准曲线

 

标准品浓度(pg/ml)

OD值1

OD值2

平均值

矫正值

0

0.066

0.065

0.065

--------

31.25

0.136

0.138

0.137

0.071

62.5

0.220

0.230

0.225

0.159

125

0.370

0.36

0.365

0.299

250

0.656

0.648

0.652

0.586

500

1.212

1.198

1.205

1.139

1000

2.121

2.119

2.12

2.054

2000

3.014

3.012

3.013

2.947

 

本图仅供参考,应以当次试验标准品绘制的标准曲线计算小鼠IL-1β的样本含量

2. 灵敏度:

低可检测小鼠IL-1β浓度达15pg/ml,

20个零标准品浓度OD的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。

3. 特异性:

不与小鼠IL-1ra 、IL-1α、IL-1 RI、IL-1 RII等反应,IL-1β等反应

4. 重复性:

板内,板间变异系数<10%

5. 回收率:

在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠IL-1β,计算回收率。

样本类型

平均回收率(%)

范围(%)

血浆

96

91-101

细胞培养上清

101

95-107

6. 线性稀释

分别在选取的4 份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 IL-1β,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。

稀释比例

回收率(%)

血浆

细胞培养上清

1:2

平均回收率(% )

95

98

范围(%)

88-102

93-103

1:4

平均回收率(% )

92

104

范围(%)

87-97

101-107

1:8

平均回收率(% )

95

109

范围(%)

92-98

105-113

1:16

平均回收率(% )

101

112

范围(%)

96-106

107-117

 

参考文献

1. Oppenheim, J.J. et al. (1986) Immunol. Today 7:45.

2. March, C.J. et al. (1985) Nature 315:641.

3. Thornberry, N.A. et al. (1992) Nature 356:768.

4. Sims, J.E. et al. (1988) Science 241:585.

5. Huang, J. et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12829.

6. Greenfeder, S.A. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:13575.

7. Sims, J.E. et al. (1994) Clin. Immunol. Immunopathol. 72:9.

8. Sims, J.E. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6155.

9. Svenson, M. et al. (1993) Cytokine 5:427.

10. Giri, J.G. et al. (1994) J. Immunol. 153:5802.

11. Wewers, M.D. et al. (1997) J. Immunol. 159:5964.

12. da Cunha, A. et al. (1993) J. Neuroimmunol. 42:71.

 

 

 

 

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