PCR试剂 SYBR Green I核酸染料（PCR级，10000X）
货号：SR4110
规格：50/100ul
保存：-20℃避光保存，有效期少一年。

产品说明 ：
    SYBR Green I 染料是一种直接与双链 DNA (dsDNA) 结合的荧光染料，是荧光定量 PCR 常用的 DNA结合染料。在定量 PCR 中，SYBR Green I 可与双链 DNA（dsDNA）非特异性结合后发出荧光，则可以通过检测反应体系中的 SYBR Green I 荧光强度，达到检测 PCR 产物扩增量的目的。游离状态下，SYBR Green I 发出微弱的荧光，一旦与 dsDNA 结合，其荧光增加 1000 倍，一个反应发出的全部荧光信号与出现的 dsDNA 量成比例，且会随扩增产物的增加而增加；所以通过检测 PCR 反应液中的荧光信号强度，可以对目的基因进行准确定量，同时还可以测定扩增的目的 DNA 段的熔解温度。

使用说明 ：
    使用时，配置PCR反应混合液， 将10000×SYBR Green I浓缩液加入到PCR反应体系， 使终浓度为0.5× （0.2×到 1×之间调整） 。以上操作建议在冰上进行。
注： ① 反应液配制方法和 PCR 扩增条件请参照 DNA 聚合酶使用说明。
     ② Realtime PCR 扩增仪的使用方法，请参照各仪器说明书。

注意事项 ：
    使用浓度对荧光 PCR 结果的影响
    SYBR Green I 的使用浓度是保证荧光定量 PCR 实验成功非常关键的因素。如果 SYBR Green I 的浓度过低会使荧光信号的变化降低，这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制 PCR 反应，降低PCR 反应效率。所以一般在使用 SYBR Green I 时应根据实际情况优化使用浓度，反应的终浓度为 0.2×到 1×之间。
    镁离子浓度的影响
    提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。 我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时，镁离子浓度比无 SYBR Green I 的普通 PCR 反应高出 0.5～3mM。

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 SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。
用QPCR来做miRNA的扩增其实是一件比较难的事，因为miRNA是只有18-23个碱基的单链RNA，普通的PCR扩增方法是无法直接用的，所以目前有两种主流的解决思路：
方法1、设计颈环引物，反转录得到cDNA，然后结合探针的方法在PCR扩增时进行荧光定量，这种方法以ABI公司为代表，优点是扩增特异性好，缺点是成本太高，所以ABI的miRNA技术服务是很贵的 
方法2、通过在miRNA 3‘端进行加A，以延长片段的长度，然后通过特殊设计的RT引物反转录得到cDNA，后用SYBR为荧光染料进行定量PCR，此法优点是价格便宜，操作简单，灵敏度高，尤其对低丰度miRNA的检测要明显优于探针法；缺点是特异性稍差，不过近研究发现miRNA 的3’端有多样性。
总的来说方法2要好于方法1 ，因为一旦miRNA 3‘端增加或减少一两个碱基，颈环引物则无法使用，也就是说方法1只能检测某种miRNA的一种序列。

PCR试剂 SYBR Green I核酸染料（PCR级，10000X）

 参考文献：
《Regulation of insulin resistance by targeting the insulin‐like growth factor 1 receptor with microRNA‐122‐5p in hepatic cells》 作者:Li Dong，Xiaoyu Hou，Fengsui Liu，Hong Tao，Yunjia Zhang，Hang Zhao，Guangyao Song 期刊:Cell Biology International 影响因子:2.127 PMID:30958584
《Collagen facilitates the colorectal cancer stemness and metastasis through an integrin/PI3K/AKT/Snail signaling pathway》 作者:Xiangbin Wu，Jianhui Cai，Zhigui Zuo，Jinlei Li 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影响因子:3.743 PMID:30913493
《MMP-9 secreted by tumor associated macrophages promoted gastric cancer metastasis through a PI3K/AKT/Snail pathway》 作者:Liu Lin，Yu Ye，Xiumei Zhu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影响因子:3.743 PMID:31202170