羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒

产品名称: 羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒

产品英文名: Hydroxyproline(HYP) Content Assay Kit

产品货号：BC0250             产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：50管/48样          产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：420
库存状态：现货                          
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简要介绍：
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
    样品经水解产生游离的HYP，进一补被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基ben甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。

产品详细描述
产品内容：
提取液：6mol/L盐酸，自备。浓盐酸：H₂O（V/V）= 1:1，室温保存。
试剂一：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
    标准品：液体1mL×1支，0.5mg/mL 羟脯氨酸标准品，4℃保存。
产品说明：
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样品经酸水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基ben甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。
试验中所需的仪器和试剂：
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、6mol/L盐酸和蒸馏水。
操作步骤：
一、羟脯氨酸提取
1. 组织：称取约0.5g样品于玻璃管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。加入5mL的提取液，煮沸或110℃烘箱26小时消化没有可见大的团块，16000rpm，25℃，离心20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），用10mol/LNaOH（约3mL）调节pH值6～8范围内。蒸馏水定容8mL，取上清待测。（过程中可能有黑色物质生成，若长时间不能消化，可能为碳化的物质）
2. 细胞：取500万个细胞，加入1mL的提取液，煮沸或110℃烘箱26小时消化透明状，16000rpm，25℃，离心20min，用10mol/LNaOH（约0.5mL）调节pH值6～8范围内。蒸馏水定容2mL，取上清待测。
二、测定操作：

1. 将标准品稀释为15、7.5、3.75、1.875、0.938、0.469、0.234、0.117ug/mL的标准溶液。
2. 按下表进行操作：

三、羟脯氨酸含量计算公式

1. 标准曲线的绘制：

以标准溶液的浓度为x轴，∆A标准（∆A =A标准管-A对照管）为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将∆A测定（∆A =A测定管-A对照管）带入方程得到x。

1. 羟脯氨酸含量的测定：

（1）按样本鲜重计算：
组织羟脯氨酸含量（µg/g 鲜重）= x×V样品÷（W×V样品÷V组提）=8x÷W。
（2）按样本蛋白浓度计算：
组织羟脯氨酸含量（µg/mg prot）= x×V样品÷（Cpr×V样品）=x÷Cpr。
（3）按细菌或细胞密度计算：
细胞羟脯氨酸含量（µg/10⁴ cell）= x×V样品÷（细胞数量×V样品÷V胞提）=2x÷细胞数量。
V样品：加入的样品体积，0.2mL；V组提：组织提取液体积，8mL；V胞提：细胞提取液体积，2mL；W：样本鲜重；细胞数量：以10⁴计；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。
注意事项：

1. OD值大于1，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2. 试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。

     3、按样本蛋白浓度计算时，需单独提取样本中的蛋白质并测定。

 相关文献：

《Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin》 作者:Litong Fan  Jiaqing Chen  Yanmeng Tao  Boon Chin Heng  Jiakuo Yu  Zheng Yang  Zigang Ge 期刊:Wiley Online Library 影响因子: PMID:30644571