脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒（微量法）说明书

货号:BC0255

规格: 100T/96S

脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒（微量法）​产品简介：

HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

样品经水解产生游离的HYP，进一补被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。

产品内容：

组织提取液：6mol/L盐酸，自备。浓盐酸：H2O（V/V）= 1:1，室温保存； 

细胞提取液：液体100mL×1 瓶，4 ℃保存；  

试剂一：液体10mL×1 瓶，4 ℃避光保存；  

试剂二：液体10mL×1 瓶，4 ℃避光保存。

脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒（微量法）操作步骤：

一、羟脯氨酸提取：  

1. 组织：取约0.2g 样品于玻璃管，加入2mL的组提取液，置于110℃烘箱，水解612小时，16000rpm，25℃，离心20min，用提取液定容2mL，取上清待测。  

2.  细胞：取约500 万个细胞，加入1mL 的细胞提取液，于高压消毒器中15 磅保持30min，自然降压后待测。

二、测定操作：

羟脯氨酸含量计算：

用微量比色皿测定的计算公式:

标准曲线：y=64.875x+ 0.0251，R²=0.9991  

（1）按组织计算  

HYP含量（mg/g） =（A₅₆₀-0.0251）÷64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)  

                         =0.154×（A₅₆₀-0.0251）÷W  

（3）按细胞计算：

HYP含量（mg/10⁴cell)= （A₅₆₀-0.0251）÷64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）

=0.077×（A₅₆₀-0.0251）÷细胞数量（万个）

V反总：反应体系总体积，0.3mL； V样：反应中样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，mL； W：样本质量，g。

用96孔板测定的计算公式如下:

标准曲线：y=32.4375x+ 0.0251，R²=0.9991  

（1）按组织计算  

HYP含量（mg/g） =（A₅₆₀-0.0251）÷32.4375×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)  

                         =0.308×（A₅₆₀-0.0251）÷W  

（3）按细胞计算：

HYP含量（mg/10⁴cell)= （A₅₆₀-0.0251）÷32.4375×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）

=0.154×（A₅₆₀-0.0251）÷细胞数量（万个）  

V反总：反应体系总体积，0.3mL； V样：反应中样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，mL； W：样本质量，g。

注意事项：

1、OD值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。