普鲁士蓝染色试剂盒（伊红法）

产品简介：

含铁血黄素(hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls普鲁士蓝反应(Prussian blue reaction)又称为含铁血黄素染色，常见于吞噬细胞内或间质内，主要显示三价盐。Perls普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，：常用于显示局部组织内的各种出血性病变，常见于吞噬细胞内。

在判断含铁血黄素沉积时，用Perls反应可以得到证实, 该染色法可以很好地区分含铁血黄素与其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广，可以进行复染。 其复染液采用伊红染色液，也是常用的复染液，该复染液染色时间较核固红染色液要短。

普鲁士蓝染色试剂盒（伊红法） 

操作步骤（仅供参考）：

（一）石蜡切片染色

1、 切片脱蜡水 ① 二甲苯(Ⅰ) 5～10min ② 二甲苯(Ⅱ) 5～10min ③无水乙醇(Ⅰ)（可选） 3～5min ④无水乙醇(Ⅱ)（可选） 3～5min ⑤95%的乙醇 3～5min ⑥90%的乙醇 3～5min ⑦80%的乙醇 3～5min ⑧自来水或蒸馏水冲洗(Ⅰ) 1～3min ⑨自来水或蒸馏水冲洗(Ⅱ) 1～3min

2、染色 ①切片入 Perls stain（见注意事项 6） 15～30min ②蒸馏水充分冲洗 5～10min ③伊红染色液淡染细胞核 15～30s ④自来水冲洗 1～5s。

3、脱水、透明、封固 ①90%乙醇 10～20s ②95%乙醇(Ⅰ) 1～2min ③95%乙醇(Ⅱ) 1～2min ④ 无水乙醇(Ⅰ) 2～3min ⑤无水乙醇(Ⅱ) 2～3min ⑥ 二甲苯(Ⅰ) 2～3min ⑦二甲苯(Ⅱ) 2～3min ⑧ 二甲苯(Ⅲ) 2～3min ⑨中性树脂封片。

（二）冰冻切片染色

1、 无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗 2～3min。

2、 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

（三）细胞染色

1、4%多聚甲醛固定 10～20min。

2、自来水冲洗 2 次，每次 2min。

3、蒸馏水冲洗 2 次，每次 2min。

4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

染色结果：含铁血黄素或三价铁 蓝色细胞核、其他组织 红色阴性对照（可选）取相同连续切片脱蜡水。置于 5%的草酸中，孵育 2-6h 后，经 Perla stain，需要步骤同上。结果为阴性。

注意事项： 1、 切片脱蜡应尽量干净。 2、 组织固定常采用 10%的中性福尔马林，经普通福尔马林长期固定后，组织会有损伤。 3、 临用前取 A1、A2 液等量混合，即为试剂（A），现配现用，不可提前配制。 4、整个操作过程中容器要干净，避免使用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质。 5、避免使用酸性固定剂，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。 6、Perls stain 染色时，应根据样品情况调整着色时间。 7、所有检查切片都应使用同一个阳性对照切片,选择适合的对照非常重要.尸检肺组织是一个很好的对照,包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞). 8、95%乙醇、90%乙醇应经常更换新液. 9、 冰冻切片和细胞的染色,应根据具体情况摸索实验条件. 10、 为了您的健康和安全,请穿实验服并戴一次性手套操作.