4×SDS-PAGE分离胶缓冲液 蛋白质电泳

英文名称 SDS-PAGE Separating Gel Buffer，4×(pH 8.8)

储存条件 RT，有效期1年

本试剂是由Tris和SDS混合而成的，主要用于SDS-PAGE凝胶（变性聚丙烯酰胺凝胶）制备实验。配制分离胶时，10ml制胶体系中加入2.5ml（4倍稀释）。

组分                              浓度

Tris-HCl（pH=8.8）    1.5mol/L

SDS                              0.4%（W/V）

注意事项：若有白色沉淀析出，可置于37℃水浴，析出溶解后再使用。

 PAGE凝胶银染试剂盒主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比EB高200倍，该产品整个过程只需要20分钟，操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的DNA 条带。下面就以索莱宝产PAGE凝胶银染试剂盒介绍使用PAGE凝胶银染试剂盒染色操作步骤，以及操作过程中需要的注意的问题。
操作步骤:
一、染色液配制
需要配制的染色液体积根据PAGE 胶的大小而定，一般的mini-PAGE 胶需要20-30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。
1，硝酸银染液：称取0.2g 硝酸银，加入到90ml 去离子水中*溶解，加入10ml 溶液A 混匀，现用现配。
2，显色液：分别取溶液B 和溶液C 各10ml 加入80ml 去离子水中混匀，现用现配。
3，终止液：取终止液D 10ml 加去离子水稀释100ml，现用现配。
二、染色：
1，PAGE 电泳结束后，将PAGE 蛋白胶转移玻璃平皿或搪瓷盘中，用去离子水漂洗两遍，每次2min。
2，将PAGE 胶转移硝酸银染液中，使染液没过PAGE 胶，室温染色10min。可置于摇床上缓慢摇晃，使其染色均匀。
3，弃去染色液，用去离子水快速漂洗三次，每次半分钟。
4，将PAGE 胶转移显色液中，使显色液没过PAGE 胶，室温摇晃显色条带清晰可见。
5，可选，将PAGE 胶转移终止液中，终止显色1min。
6，银染后PAGE 胶可拍照保存或用于后续试验。

参考文献：

《Role of Paraoxonase-1 in the Protection of Hydrogen Sulfide-Donating Sildenafil (ACS6) Against Homocysteine-Induced Neurotoxicity》 作者:Xiao-Qing Tang，Rong-Qian Chen，Ling Dong，Yan-Kai Ren，Duan-Fang Liao 期刊:Journal of Molecular Neuroscience 影响因子:3.412 PMID:22843253

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