谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒

一、粗酶液提取：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤：

1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长420nm，蒸馏水调零。

2、 样品测定（在 EP 中加入下列试剂）：试剂名称（uL） 测定管 对照管样本 25 蒸馏水 25 试剂一 100 100 试剂二 400 400 混匀，37℃水浴1 小时试剂三 525 525 混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，在EP 管中加入下列试剂上清液 650 650 试剂四 150 150 试剂五 100 100 试剂六 100 100 混匀，420nm 处读取吸光值 A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管

三、计算：

1、 血清（浆）GLS 活性单位定义：每mL 血清（浆）每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol /min/mL）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷T=363.1×(ΔA-0.1301)

2、 组织、细菌或细胞GLS 活性

（1） 按样本蛋白浓度计算：单位定义：每mg 蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol /min /mg prot）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr。

（2） 按样本鲜重计算：单位定义：每g 组织每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol /min /g 鲜重）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 样总) ÷T=363.1×(ΔA-0.1301)÷W。

（3） 按细菌或细胞密度计算单位定义：每1 万个细菌或细胞每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol /min /10 4 cell）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 样总)÷T =0.7262×(ΔA -0.1301) V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。 GLS 催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。

谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒

试剂一×1 瓶，60 mL，4 ℃保存；试剂二×1 瓶，20 mL，4 ℃保存；试剂三×1 瓶，30 mL，常温保存；试剂四×1 瓶，10 mL，常温保存；试剂五×1 瓶，6 mL，常温保存；试剂六×1瓶，6 mL，常温避光保存。