琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒

操作步骤：

一、样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：

1、 称取约0.1g 组织或收集500 万细菌或细胞，加入1mL 试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、 将匀浆600g，4℃离心5min。

3、 弃沉淀，将上清液移另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的SDH（此步可选做）。

5、 在步骤④的沉淀中加入200uL 试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次），用于线粒体SDH 活性测定。

二、测定步骤和加样表

1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长600nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定（1）在试剂四中加入18mL 蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min； 用不完的试剂4℃保存一周；（2）在试剂五中加入1mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；（3）在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 样本、10μL 试剂五和180μL 试剂四，混匀，立即记录600nm 处20s 时的吸光值A1 和 1min20s 后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1） 按样本蛋白浓度计算单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 样) ÷T=952×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算单位的定义：每g 组织每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=192×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性（nmol/min/10 4 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.385×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10 -4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×10 4 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

b. 用96 孔板测定的计算公式如下

（1） 按样本蛋白浓度计算单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(V 样×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算单位的定义：每g 组织每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=384×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH 活性（nmol/min/10 4 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.77×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10 -4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×10 4 L / mol /cm；d： 96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

试剂一：100mL×1 瓶，-20℃保存；试剂二：20mL×1 瓶，-20℃保存；试剂三：1.5mL×1 支，-20℃保存；试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×1 支，-20℃保存；

相关文献： 

《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448