总胆固醇(TC)含量检测试剂盒

总胆固醇（TC）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Total cholesterol (TC) content test kit
关键词:总胆固醇|总胆固醇含量检测|TC|TC含量检测
货号：BC1980
规格：50T/48S

产品简介：
总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为 FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和 H2O2；后利用过氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物，其在 500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与TC 含量成正比。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、天平、低温台式离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、EP 管、蒸馏水、异丙醇。

产品内容：
提取液：异丙醇 50mL×1 瓶，自备，4℃保存；
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 400μL×1 支，4℃保存；
试剂三：液体 60μL×1 支，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，10mg胆固醇，4℃保存。临用前加入517μL提取液，振荡溶解，即为50μmol/mL的胆固醇标准溶液。
工作液的配制：将试剂一：试剂二：试剂三按比例3mL：20μL：3μL配制工作液，现用现配。

操作步骤：
一、样本处理：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 2 秒，间隔 3 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接测定。
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长 500nm，蒸馏水调零。
2、 将 50μmol/mL 标准液用提取液稀释为 1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表：(在 1.5ml 离心管中依次加入下列试剂)
测定管   标准管   空白管
样品（µL）         100       -         -
标准溶液（μL）     -       100        -
提取液（μL）      -        -        100
工作液（µL）     900      900       900
充分混匀，37℃静置 15min，反应完成后于 1mL 玻璃比色皿，测定 500nm 处吸
光值 A，分别记为 A 测定管、A 标准管和 A 空白管，△A=A 测定管-A 空白管，△A 标
准=A 标准管-A 空白管，空白管只需测一次。

总胆固醇含量计算
一、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将△A 带入方程得到 x（μmol/mL）
二、总胆固醇含量的计算：
1. 血清（浆）中 FC 含量计算：
TC 含量（μmol/dL）=x×100。
2. 组织中 FC 含量计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
TC 含量（μmol/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提取）=x÷Cpr。
(2) 按样本鲜重计算
TC 含量（μmol/g 鲜重）=x×V 提取÷W= x÷W
3. 细胞、细菌中 TC 含量计算：
TC 含量(μmol/104cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100：1dL=100mL；V 提取：加入样本的提取液体积，1mL；W：样本质量，g；500:500 万个细胞数量。

注意事项
当△A 大于 1 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。

相关文献：
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