R1210 柱式法提取革兰氏阴性菌RNA试剂盒 使用说明书

该试剂盒对经典的异硫氰酸胍抽提RNA的方法进行了改良。改良后的裂解液能迅速裂解细胞，释放出RNA的同时灭活RNase。RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜上，再通过一系列漂洗和离心等步骤进一步将蛋白等杂质去除，最后用RNase-FreeddH2O将RNA从硅基质膜上洗脱。本试剂盒操作快速便捷，安全无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。
操作步骤（仅供参考）：
自备试剂：无水乙醇、异丙醇
1、取1mL过夜培养的细菌培养物（OD值不大于2.0），4℃12000rpm离心2min，尽量吸除上清。
2、向离心管中加入300μl裂解液，吹打混匀后，95℃水浴锅中放置5min。
3、4℃12000rpm离心5min，吸取上清到另一个新的EP管中（吸取时尽量避开管底白色透明胶状不溶物）。
4、向离心管中加入700μl结合液(使用前请先检查是否已加入异丙醇)，上下颠倒充分混匀。
5、备注：此时可能会出现白色絮状沉淀，属于正常现象，不影响RNA的提取。
6、向吸附柱中加入600ul混合液（包括沉淀物），静置1min。4℃12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
备注：再将剩余混合液重复步骤5
7、向吸附柱中加入500μL漂洗液1(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，4℃12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入600μL漂洗液2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，4℃12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9、4℃12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加30-100μL洗脱液，室温放置2min，4℃12000rpm离心2min，得到RNA溶液。RNA保存于-80℃。
注意事项：
1、所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2、RNAOD值2.0-2.2之间。
加完裂解液尽快把盖子扣好，尽量减少与空气接触。