【生物小知识】胰蛋白酶消化细胞
2015-08-17索莱宝生物
细胞外含有多种胞外蛋白，如胶原蛋白，这些蛋白使细胞间或细胞与培养瓶内壁粘连起来。用胰蛋白酶分解这些蛋白质后就可以使它们分开，这个过程叫做胰蛋白酶的消化作用。
贴壁细胞就是贴着细胞瓶底生长的细胞，细胞长满瓶底后需要传代，这个时候直接吹打细胞对细胞伤害很大，需要用胰蛋白酶对其消化，使细胞与瓶底贴合的没那么牢固，这个时候就可以进行吹打使其从瓶底脱落下来。
胰蛋白酶有消化作用，处理动物组织后，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。一般消化细胞用0.25%的胰酶，而且时间一定要掌握好，一边消化，一边在显微镜下观察，注意不能消化过了反而对细胞自身造成损伤。除了胰蛋白酶外胶原蛋白酶也可以使用，因为这两种蛋白酶的pH活性比较适中。
我公司的胰蛋白酶消化液种类全面，可以满足大部分客户需求。主推产品（T1300/T1320）胰蛋白酶-EDTA 消化液(含酚红和不含酚红)。
产品说明 ：
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶，EDTA 等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，使组织或贴壁细胞分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。
索莱宝生产的胰蛋白酶-EDTA 消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶和 0.02%EDTA（0.53mM），溶于无钙镁平衡盐溶液中，经过滤除菌，可以直接用于培养细胞和组织的消化。本产品具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点。通常室温消化2分钟左右就可以消化大多数贴壁细胞。胰蛋白酶-EDTA消化液有含酚红和不含酚红2类产品，酚红具有pH指示作用。
保存：-20℃保存，有效期 12 个月。
使用方法 ：
1. 贴壁细胞的消化：
a) 吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA 消化液，盖过细胞即可，室温放置 1-2 分钟。不同的细胞消化时间有所不同，对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。
c) 显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
d) 如果发现消化不足，可加入胰蛋白酶-EDTA 消化液重新消化。
e) 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g 离心 1 分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2. 组织的消化：
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
注意事项 ：
1．由于组织或细胞性质不同，实验人员应依据具体情况，确定佳消化时间；消化细胞时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁和生长状况；
2．胰蛋白酶-EDTA消化液不含抑菌剂，在使用过程中要特别注意无菌操作，避免消化液被微生物污染；
3．胰蛋白酶-EDTA消化液，不宜4℃长期保存，切忌反复冻融，小量使用时建议分装冻存；
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
T1300 胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚红 solarbio 100ml
T1320 胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)含酚红 solarbio 100ml
T1350 胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚红 solarbio 100ml
