鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明
货号：C8062
保存：4℃保存，切勿冻存，有效期为一年。
规格：10mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 无菌。
产品简介：
索莱宝鼠尾胶原蛋白 I型(rattailtendon collagen type I)是通过 Birkedal-Hansen的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。本公司鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。
1，在使用索莱宝鼠胶原蛋白I型包被的细胞培养皿中检查到PC-12细胞的贴壁和生长。
2，在 1mg/ml浓度以上，pH为7左右时可形成具有一定强度的三维胶，检查到NIH-3T3细胞在三维胶内正常生长、PC-12细胞在三维胶表面正常生长。
使用方法：
1、细胞培养器皿的表面包被推荐浓度： 1-5ug/cm2
以包被浓度为 2 ug/cm2 为例：用无菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。
按以下表格体积加到相应的培养器皿中：

按以下表格体积加到相应的培养器皿中：
                  表面积（cm2 ,每孔或每皿）        加入 0.012mg/ml 胶原的体积( ul )
96孔细胞培养板           0.3                                50
24孔细胞培养板           1.9                                300
12孔细胞培养板           3.8                                600
6孔细胞培养板            9.5                                1580
35mm细胞培养皿           8                                  1330
60mm细胞培养皿          21                                  3500
100mm细胞培养皿         55                                  9170
确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过ye晾干。也可以在室温放置 1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃少可保存3个月以上的时间。
2、三维胶原的制备
鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06×体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。
需要的溶液（均需要无菌、预冷）：10×PBS（可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示）或 10×培养液，, 0.1mol/L NaOH，0.1mol/L 乙酸(一般不用)，双蒸水
A． 不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul 10×PBS
或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。
B．含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul 10×PBS或10×培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。
注意事项：
鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。