从2小时到4周——索莱宝脱钙液全系列速度谱系
在组织病理学与科研实验中,骨组织、牙齿及钙化病灶的制片始终是一个技术难点。含钙组织因钙盐与石蜡密度差异显著,无法直接用石蜡包埋切片。脱钙,作为骨组织制片中最为关键的组织处理步骤,直接决定了切片质量与后续染色效果。北京索莱宝科技有限公司(Solarbio)深耕生命科学试剂领域二十余年,目前已推出12种脱钙液和2种脱钙辅助试剂,覆盖骨松质、骨密质、牙齿等各类含骨组织的脱钙需求,适用于病理染色、免疫组化、原位杂交等多种标记观察方法。
一、脱钙液的核心作用与原理
脱钙液的核心功能是去除组织中的钙盐、软化硬组织,为后续切片与实验分析提供基础。其作用机理主要分为两类:
螯合作用:EDTA(乙二胺四乙酸)通过与钙离子形成稳定的螯合物,将钙盐从组织中逐步“抽离”。这种方式极为温和,对组织结构影响最小,能较好地保存组织的酶类和抗原活性,经EDTA脱钙后的组织可进行免疫组化和原位杂交染色。
酸解作用:有机酸(甲酸、柠檬酸等)和无机酸(盐酸等)通过酸性溶解方式快速去除羟基磷灰石等钙盐。酸类脱钙液速度远快于EDTA,但对组织结构的保护性相对较弱。
二、索莱宝脱钙液产品线全景
索莱宝脱钙液产品体系可划分为四大类别:快速酸类脱钙液、温和螯合类脱钙液、复合酸类脱钙液、电解法脱钙液。
(一)快速酸类脱钙液——JYBL系列
1.JYBL-Ⅰ脱钙液(货号:G2470)
JYBL-Ⅰ脱钙液主要由稀酸、甲醛、甲酸等组成。其突出优势在于作用迅速,24~36小时即可完成脱钙,同时对组织结构损害较小、脱钙。该产品特别适用于日常病理科骨组织标本的脱钙。需要注意的是,不宜用化学方法确定脱钙终点。
2.JYBL-Ⅱ脱钙液(货号:G2471)
作为JYBL-Ⅰ的升级版,JYBL-Ⅱ脱钙液作用更为迅速,一般24小时即可完成脱钙,比JYBL-Ⅰ时间更短。同样适用于日常病理科骨组织标本脱钙,但不宜用化学方法确定脱钙终点,对组织结构有一定损伤。
3.JYBL-Ⅲ脱钙液(货号:G2472)
JYBL-Ⅲ脱钙液主要由甲醛、高浓度甲酸等组成。甲酸被誉为“接近无机酸和有机酸临界线的一种有机酸”,对组织结构损害小,脱钙。该产品适用于病理科特殊骨组织标本脱钙,脱钙前对组织进行固定效果更佳。
4.JYBL-Ⅳ脱钙液(货号:G2473)
JYBL-Ⅳ脱钙液主要由甲醛、甲酸等组成,不含强酸,特别适用于骨组织快速脱钙。其最大亮点在于可升温至37℃快速脱钙,常规大小的骨片仅需2~3小时即可完成。同时兼具对组织结构损害小、脱钙优势。
(二)温和螯合类脱钙液——EDTA系列
5.EDTA脱钙液(pH7.2)(货号:E1171)
这是索莱宝经典的螯合型脱钙液,pH值约为7.2。其优点显著:经EDTA脱钙的组织染色结果好,对组织结构损害小,可用化学方法准确确定脱钙终点。缺点是脱钙速度很慢,一般需要数周至数月;脱钙后组织会稍微变硬。
6.EDTA脱钙液(酶保护型)(货号:G2521)
在常规EDTA脱钙液基础上添加了酶保护剂,pH值约为7.2-7.4。其优势更为突出:经EDTA脱钙的组织染色结果更好;对组织结构损害比常规EDTA脱钙液更小;可显著减少脱钙骨组织中ALP(碱性磷酸酶)酶活性的丢失。尤其适用于需要保留酶活性的科研场景。
7.福尔马林-EDTA脱钙液(货号:G2520)
该产品主要由EDTA、福尔马林等组成,pH值约为7.2~7.4。福尔马林的加入使得脱钙与固定同步进行,相对于常规EDTA脱钙液,对组织结构损害更小,但脱钙速度更为缓慢。
(三)复合酸类脱钙液
8.VonEbener脱钙液(货号:G2500)
VonEbener脱钙液主要由氯化钠、盐酸等组成。其优点在于细胞核染色结果好,且无需水洗,操作极为便捷。缺点是不宜用化学方法确定脱钙终点。
9.Plank-Rychlo脱钙液(货号:G2474)
Plank-Rychlo脱钙液是一种复合酸类脱钙液,性质较温和,脱钙效果较好。相比单一酸类脱钙液,它对组织的损伤要小很多;相比螯合脱钙液,速度又快很多。额外添加的辅助试剂可在快速充分脱钙的同时防止纤维组织过度膨胀,减少组织破坏对染色的影响。
10.柠檬酸盐脱钙液(货号:G2700)
柠檬酸盐脱钙液是缓冲脱钙液,属于缓慢脱钙液,主要由柠檬酸、柠檬酸盐、硫酸锌等组成。其优点在于经该液脱钙的组织染色结果好,对组织结构损害小。缺点是脱钙速度很慢,不适合常规标本脱钙使用,且脱钙后组织会稍微变硬。
11.AFIP甲酸-柠檬酸脱钙液(货号:G2480)
该产品由甲酸溶液和柠檬酸钠溶液组成,临用前等量混合。AFIP配方是病理学领域的经典脱钙方案,兼具甲酸的脱钙效率与柠檬酸盐的缓冲保护作用。
12.甲酸脱钙液(货号:G2490)
甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。其优点在于对细胞核染色结果较好,兼具脱钙和组织固定的双重作用,适用于小块组织和牙齿的脱钙。缺点是脱钙速度较慢,不适合常规标本和密皮质骨脱钙使用,脱钙后需用碱溶液进行中和处理。
13.混合甲酸盐酸脱钙液(1:1:8)(货号:G2695)
这是一种慢性脱钙液,对组织损伤较小,但脱钙时间较长。
(四)电解法脱钙液
14.电解脱钙液(甲酸法)(货号:G2672)
电解脱钙液主要由10%甲酸溶液和8%盐酸水溶液组成。其脱钙速度极快——直流6V电压下,厚度约5mm的组织可在10~180分钟内脱钙完毕。适用于骨松质、骨密质和牙齿等大多数组织的脱钙。但需注意:电解脱钙对组织精细结构有一定损害,不适用于电镜和免疫组化含骨样本制备;脱钙后需搭配脱钙后碱处理液进行中和处理。
三、脱钙辅助试剂
1.脱钙终点检测试剂盒(化学法)(货号:G2880)
脱钙程度的精准控制至关重要——脱钙不足会导致切片困难,脱钙过度则会增加组织损伤。该试剂盒通过化学方法检测脱钙终点,帮助实验人员精准把握脱钙进程。
2.脱钙后碱处理液(货号:G3430)
组织脱钙后,需立即将组织中的酸中和掉,使组织迅速脱酸和中性化,以保证切片质量和染色效果。脱钙后碱处理液主要由硫酸na、硫酸锂等组成,建议过夜处理。
四、操作要点与注意事项
取材:骨组织脱钙时,取材不宜过厚,一般约5mm。
固定与清洗:组织固定后,用PBS清洗3次,每次20分钟;再用蒸馏水清洗3次,每次20分钟。
脱钙:将组织放入20~30倍体积的脱钙液中。EDTA脱钙液建议置于2~8℃环境中,每天更换一次脱钙液——骨松质约需2周,骨密质约需4周。酸类脱钙液通常在室温下进行。
终点判断:可采用物理法(针刺无阻力感)或化学法(检测试剂盒)判断脱钙终点。
安全提示:本产品仅供科研使用,操作时请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩。