病理染色——各种组织切片方法如何选择

组织学被定义为对细胞和组织的微观结构（显微解剖学）的科学研究，其重要组成就是组织的制片和染色观察。随着显微镜技术和免疫实验等的发展，组织制片切片技术也得到了广泛的应用，自常用的石蜡切片、冰冻切片中演化出了碳蜡切片、塑封切片、振动切片和超薄切片等等适用于不同实验需求的制片方式。今天，小编就来带大家一起了解一下这些切片方式和它们的应用方向。

11111 石蜡切片

常规染色，组化或是荧光优先推荐做石蜡切片。

原因：石蜡切片对组织的形态保存比冰冻切片好，并且对抗原基本无影响

如HE染色、结缔组织多色染色、神经组织染色、细胞内色素以及沉着物染色、DAB显色、荧光标记染色等均建议优先制成石蜡切片。

例：

脑组织-尼氏染色-冰冻切片	脑组织-尼氏染色-石蜡切片

肝组织-Masson染色-冰冻切片	肝组织-Masson染色-石蜡切片

2、碳蜡切片

   不经过脱水透明步骤，对于脂质等结构保存效果优于石蜡切片，适用于肝脏组织用甲醛钙固定液固定后的油红O染色，

3、塑封切片

对于硬度较高的成骨组织钙盐染色和较韧的植物组织染色，例如钙盐茜素红染色和植物甲苯胺蓝染色，可以考虑制成塑封切片，降低切片难度，从而更好的显示钙盐沉积情况和植物的显微结构。

4、超薄切片

   对于高尔基染色电镜观察之前，用于阳性神经元部位定位。

5、冰冻切片

脂质染色(油红O染色，苏丹染色)必须做冰冻切片，使用异丙醇固定（不能使用丙酮固定，会脱脂），经多聚甲醛固定后脂质会呈空泡状态。脑组织NOS酶染色可以先使用PFA-蔗糖溶液固定沉糖脱水后再进行包埋切片。

脂肪肝组织-油红O染色-石蜡切片	脂肪肝组织-油红O染色-冰冻切片

6、速冻切片

对于不能固定的新鲜组织酶化学染色，宜采取直接使用液氮速冻、OCT包埋制成切片，大部分酶活均能很好保存下来，如ATP酶染色、ALP染色、ROS染色、β-半乳糖甘酶染色、SDH染色、MAO染色等。

肺组织-碱性磷酸酶（ACP）染色-石蜡切片	肺组织-碱性磷酸酶（ACP）染色-冰冻切片

7、振动切片

组织不冰冻，无冰晶形成和组织抗原破坏，在免疫组化染色前避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原，主要用于显示神经系统抗原分布研究，如脑组织的高尔基染色。

注意事项

1、需要进行石蜡包埋的组织一般不能冰冻。如果标本已经放在-80℃冰箱冷冻了之后又想要做石蜡切片，将标本取出来千万不要解冻直接放于固定液内固定(在固定液内边解冻边固定)。

2、组织形态结构保存完好程度顺序：新鲜组织立即投入固定液内固定石蜡切片>组织-80℃冷冻后投入固定液内固定石蜡切片>新鲜组织立即投入固定液内固定冰冻切片>组织-80℃冷冻后直接冰冻切片。