细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期,细胞对前向角光散射的能力显着降低,对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期,前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
细胞凋亡检测试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。
在使用细胞凋亡检测试剂盒应注意的事项:
1、样本处理:根据试剂盒要求,对细胞或组织样本进行适当处理,如消化、固定、破膜等。
2、荧光染料选择:若细胞本身带有荧光,需选择与细胞自发荧光不同检测通道的荧光染料。
3、仪器配置:了解实验室现有实验仪器配置,确保能够准确检测荧光信号。
4、对照设置:设置适当的对照实验,如阴性对照和阳性对照,以验证实验结果的准确性。