使用前经过清洁消毒，LB培养基清洁与否对工作影响较大，可影响培养基的酸硷度，若有某些化学药品的存在，会抑制细菌的生长。新购的培养基应先用热水冲洗，再置于 1%或2%的盐酸溶液中浸泡数小时，使游离硷性物质除去(或用砂皂洗刷)，再用蒸馏水冲洗二次，若要培养细菌再用高压蒸气灭.菌(一般在15磅高压蒸气)，即120 ℃的温度下30分钟灭菌，置室温中于燥，或用干热灭菌，就是将培养基置于烘箱内，温度控制在120 ℃左右的情况下维持2小时，即可杀死细菌的胞芽。经过消毒的培养基才能接种培养使用。
 

　　LB培养基通常使用固体培养基制成平板培养(就是平板皿名称的由来)，平板培养基制作是将已装好的灭菌琼脂培养基，用温水(无菌)熔化，取下试管的棉花塞，管口于酒精灯火焰上通过，然后微启灭菌的培养基盖，使试管口能深入为宜，倾入培养基后即可盖密，再轻轻的摇匀倾入的培养基，使之均匀的、分布于皿底上疑结，即得平板培养基。由于细菌的繁殖、发育生长是与所供给的培养基(营养)有直接关系，尤其是作定量检验分祈，对提供营养物的多少，有决定意义，细菌培养时对营养物提供的多少，是否均匀，这对于培养基、皿底是否平整极为重要。如培养基皿底不平，琼脂的培养基分布的厚薄随坩乔皿皿底是否平整而有厚有薄，薄的部分营养供给就不足，这对定量分析有着密切关系，故对定量培养基皿底要求特别平整的原因所在。但作一般定性培养基(检验细菌、菌落生长、繁殖等)，使用普通培养基即可。
 

　　细菌的分离培养，一般标本中常同时混有数种细菌，如口腔咽喉菌及耳朵的分泌物、痰液、小便、大便等，凡需研究的细菌，须先用分离培养法，使其成为纯培养，通过对一细菌作纯培养，用肉汁加2%琼脂的固体培养基，经保温漏斗以脱脂棉花过滤，注入试管中，二天后检验新菌，再投入培养基内，先制成平板，在无菌的条件下进行接种，接种后把培养基倒置移入25一一30 ℃的恒温箱内(倒置是避免水蒸气凝成液滴滴人皿底内，影晌菌落的生长)，通过培养进一步观察细菌的形态和色泽，研究致病的病菌，以及对它防治的效果。