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纤维素酶测定试剂盒的操作步骤

更新时间:2021-08-24点击次数:1502
   纤维素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶)是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称,它不是单体酶,而是起协同作用的多组分酶系,是一种复合酶,主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成,还有很高活力的木聚糖酶。作用于纤维素以及从纤维素衍生出来的产物。微生物纤维素酶在转化不溶性纤维素成葡萄糖以及在果蔬汁中破坏细胞壁从而提高果汁得率等方面具有非常重要的意义。存在于细菌、真菌和动物体内,能够催化纤维素降解,是一类可广泛用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。纤维素酶测定试剂盒的操作步骤:

  1、样品的准备

  (1)细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声冰浴破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3S 秒,间隔 10S,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

  (2)组织:称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

  2、加样表和测定步骤:

  试剂名称(μL) 对照管 测定管 标准管试剂一 50 50 - 试剂二 200 200 - 双蒸水 50 50 - 样本 50 - 煮沸的样本 50 - 混匀,40℃准确水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混匀,540nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,样品管计算ΔA=A 测定管-A 对照管。标准曲线的建立:540nm 处蒸馏水调零,读标准管吸光值 A。以浓度(y)为纵坐标,吸光度 A(x)为横坐标建立标准曲线。

 

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