1、样品的准备
(1)细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声冰浴破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3S 秒,间隔 10S,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
(2)组织:称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、加样表和测定步骤:
试剂名称(μL) 对照管 测定管 标准管试剂一 50 50 - 试剂二 200 200 - 双蒸水 50 50 - 样本 50 - 煮沸的样本 50 - 混匀,40℃准确水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混匀,540nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,样品管计算ΔA=A 测定管-A 对照管。标准曲线的建立:540nm 处蒸馏水调零,读标准管吸光值 A。以浓度(y)为纵坐标,吸光度 A(x)为横坐标建立标准曲线。