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免疫组化常见问题(精选)

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固定液如何选择?

固定液一般建议选择4%的多聚甲醛或者10%的中性福尔马林。但对于有些特殊组织比如眼球、脂肪等,有些公司有专门固定液,需要提前询问是否影响抗原。


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选择哪种抗原修复方法?

常用的修复方式为热修复和胰蛋白酶消化修复,应用热修复时应注意所用的缓冲溶液的pH值,常用pH值为柠檬酸盐(pH 6.0)和EDTA(pH 9.0)。

在蛋白酶消化抗原修复中,按照我们的经验,蛋白酶K效果好。

另外,抗原修复之前建议做一张HE染色,以检测抗原(组织)结构是否清晰、完整;有无人为损伤;脱蜡是否*等。具体选择哪种抗原修复方法,请参考一抗说明书。


一抗孵育条件如何选择?

选择4度过夜还是选择37度一小时?建议根据抗体说明书进行实验。如果说明书中未提及,建议选择4度过夜方式进行实验。


蜡块及白片应该如何储存?

蜡块可存放于室温,如果条件允许也可存放于4度,注意防潮。白片的储存对染色的影响目前尚不明确,因此好的做法是在使用前新鲜制备玻片。如果白片必须存放,建议在4度进行保存;不建议在存放前烘烤白片。


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