CCK-8实验可检测细胞活力、增殖、细胞毒性等,广泛应用于药物筛选等临床前实验研究。
1. 细胞铺板
将检测细胞对象按照合适的细胞浓度接种到96孔板,一般来说,每个孔这种3000-5000个细胞就可以了。当然如果是检测细胞增殖的话,可以降低细胞浓度,细胞过密会抑制细胞增殖。尤其对于贴壁细胞,细胞过密会出现细胞脱板现象,严重影响实验结果。基本上96孔板的边缘不接种细胞,但加入培养基或PBS以排除边缘效应。每个组做3个复孔。
2. 加药刺激
细胞铺板后,按照实验设计的时间点加入药物刺激。药物一般需要等比或者对倍稀释,这里就不详细赘述了。在加药物前细胞清洗2遍,这里要强调一点就是细胞拍板的时候力度要掌握好,轻了培养液拍不干净,重了会使细胞脱落。加药时*是用排枪加,此时不要让培养基中产生气泡。
3. 加CCK-8孵育,上机检测
每孔加入10微升CCK8溶液,同时避免产生气泡。也可根据实验需要调整加入CCK8的量,但是组间要统一。加入CCK8后,避光孵育1-4小时后,酶标仪检测OD450 nm处吸光值。
整个过程看似简单,但有几个地方要特别注意,包括细胞接板的密度、洗细胞时不要将细胞拍脱落、加药和CCK8溶液时不要产生气泡。注意这几点,基本上CCK8实验就能做出重复性较好的结果了。
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