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CTAB如何提取叶片DNA呢?

在生物体中核酸常与蛋白质结合在- - 起,以核蛋白的形式存在。核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类,在真核细胞中,前者主要存在于细胞核中,后者主要存在于细胞质及核仁里。在制备核酸时,通过研磨破坏细胞壁和细胞膜,使核蛋白被释放出来。在浓氯化钠溶液(1-2 mol/L)中, DNA核蛋白的溶解度很大,RNA核蛋白的溶解度很小:。而在稀氯化钠溶液(0.14mol/L)中,DNA核蛋白的溶解度很小,RNA 核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。
分离得到核蛋白后,需进一步将蛋白等杂质除去,采用的去除蛋白的方法:用含异戊醇的氯f振荡核蛋白溶液,使其乳化,然后离心除去变性蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相和氯f相中间,而DNA溶于上层水相。用两倍体积95%乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀,得到的是游离的DNA.反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液,就能将蛋白等杂质较*地除去,得到较纯的DNA制品。为了*除去DNA制品中混杂的RNA,可用RNA酶处理。生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖,在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。


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