青链霉素混合液的使用说明
使用说明
1、溶液P1在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA 全部加入),混匀,置于2-8℃保存。
2、*次使用前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的无水乙醇)。
3. 使用前请先检查溶液P2、P3和P4是否出现混浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。
4. 洗脱缓冲液体积不应少于50ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调此范围), pH值低于7. 0会降低洗脱效率。 DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
5. 质粒DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。由于质粒DNA本身的性质,清除过程可导致部分质粒DNA丢失,但内毒素却能得到大限度清除。
6. 所有溶液应用无内毒素的高纯水配制,所有器械材料均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘烤,非挥发性水溶液可高压处理。
7. DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、 40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响吸光值,但并不表示纯度低。
青链霉素混合液用于预防细胞培养的细菌污染,特别是革兰氏阳性和阴性细菌的污染。产品经过滤除菌处理,可以直接添加到细胞培养液内。青霉素的含量为10kU/ml,链霉素的含量为10mg/ml。在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml,链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。即按照100倍稀释使用即可