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蛋白酶k的作用及使用方法
2025-09-24
蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。蛋白酶K的应用比较广泛。包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH4-12.5)均有活性。蛋白酶K的主要作用：蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，以增加探针与靶核酸结合的机会，提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时，都会对细胞的结构有一定的破坏，导...
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动物基因组DNA提取方法及步骤介绍
2025-09-24
基因组DNA提取是最常见分子生物学实验之一。今天给大家介绍的是动物基因组DNA提取。DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等实验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。动物基因组DNA提取实验步骤：1、取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织...
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胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法
2025-09-22
应用：胸腺嘧啶核苷为生化试剂，制备生物培养基，例如HAT选择性培养基的制备。原理：在单抗制备中，由于需要进行选择性杀死非目标细胞，所以使用添加HAT的选择性培养基，其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它...
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简述TBST缓冲液的配制及应用
2025-09-22
TBST中含有Tris-Hcl，NaCl，Tween20这三种物质，是做WESTERNBLOT中常用的一种缓冲液。TBST缓冲液的配制1000ml×TBST的配置先称量NaCl40g，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl47.6g，倒入刚才的那个烧杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加（吐温20）5ml,转入1000ml容量瓶中，在定容，转移即可。TBST缓冲液的应用...
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DMEM培养基中DMEM粉剂配制方法步骤
2025-09-22
DMEM是现今细胞培养中比较常见的培养基之一，dmem培养基是建立在MEM培养基的基础上研究出来的，它与MEM培养基相比较，DMEM培养基中加大了MEM培养基中各种成分的用量，下文主要介绍一下自己配制DMEM的方法。1制备新鲜三蒸水或Millipore超纯水。2称取所需量的干粉培养基，加入约终体积一半的三蒸水中;若配制一个包装的培养液，在将整个包装的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包装袋内面2次，倒入培养液中，以保证所有干粉都溶解成培养液。磁力搅拌或人工搅拌使之充分溶解。3根据包装...
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简述tbst与pbst的区别及配置
2025-09-22
TBST是TBS+Tween的缩写，生物实验中提到的PBST是指PBS溶液加上Tween-20。那么tbst与pbst都有上面区别呢？tbst与pbst的区别：1、TBST的pH值随温度变化大一点，而PBST似乎容易有沉淀，若稀释抗体后需要反复使用的话建议使用TBST溶解。2、两种洗液用起来没有什么区别，都是提供一个缓冲的PH值环境，加上吐温20有助于蛋白的洗脱。PBST的磷酸盐缓冲液加Tween-20，而TBST是Tris缓冲液加Tween-20。PBS溶液是指磷酸缓冲液(...
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刚果红培养基的配方及原理
2025-09-22
纤维素刚果红培养基用于纤维素分解菌的分离和鉴别，纤维素分解菌周围有红色分解圈。刚果红培养基的配方：硝酸钠1.0磷酸氢二钠1.2磷酸二氢钾0.9硫酸镁0.5氯化-钾0.5酵母浸出粉0.5酸水解酪蛋白0.5刚果红0.2纤维素粉5.0琼脂15.0pH值7.0±0.125℃刚果红培养基的用法：称取本品25.3g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。纤维素刚果红培养基筛选菌种的原理:1、刚果红可以跟大分子多糖牢固结合。2、纤维素是大分子多...
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活性氧检测试检测的工作流程步骤
2025-09-10
活性氧检测试检测的工作流程步骤活性氧检测试检测流程：从探针加载到信号输出探针加载（细胞预处理）步骤：将细胞接种于培养板（如96孔板），待贴壁后更换无血清培养基（避免血清干扰）。加入终浓度为5-20μM的探针（如DCFH-DA），37℃孵育20-30分钟。关键点：探针浓度需优化：过高导致背景噪声，过低降低灵敏度。避光操作：荧光探针易被光淬灭，需用锡箔纸包裹培养板。ROS诱导（刺激处理）目的：人为提高细胞内ROS水平，模拟病理或应激状态。常用刺激物：氧化剂：H₂O₂（100-50...
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